Forscher haben ein neues Assay zum schnellen und empfindlichen Nachweis von Chlamydia trachomatis, die häufigste entwickelten sexuell übertragbare Infektionen (STI) bei Menschen. Dieser Vorgang dauert weniger als 20 Minuten und kann leicht am Point of Care (POC ) während des Besuchs des Patienten durchgeführt werden , berichtet The Journal of Molecular Diagnostics .
C. trachomatis betrifft 5% bis 10 % der Bevölkerung und ist besonders häufig bei jungen Erwachsenen unter 25 Jahren . Es ist ein ernstes Gesundheitsproblem aufgrund ihrer Prävalenz und mögliche schwere Langzeitfolgen . Einer der Hauptgründe, es ist so weit verbreitet ist, dass in der Mehrzahl der Fälle ( 75% der Frauen und 50% der Männer ) gibt es eine minimale bis gar keine Symptome , und es ist daher oft nicht diagnostiziert . Eine Infektion mit nicht- Urethritis bei Männern und mehreren entzündlichen Fortpflanzungsorgane Syndrome bei Frauen wie verbunden Entzündung des Gebärmutterhalses und entzündliche Erkrankungen des Beckens . Unbehandelt kann die Infektion erhöht das Risiko einer Eileiterschwangerschaft und ist eine der führenden Ursachen für weibliche Unfruchtbarkeit weltweit.
Der Assay nutzt Rekombinase -Polymerase -Amplifikation ( RPA) , einer Nukleinsäure -Amplifikationsverfahren ( NAAT ) , C. trachomatis direkt aus Urinproben . Wegen des Assays neuartigen Ansatz nicht die Reinigung von Gesamt-DNA aus der Urinprobe verlangen , wird die Notwendigkeit für spezialisierte Ausrüstung eliminiert. Das Verfahren ist deutlich weniger aufwändig, weniger zeitaufwendig und damit kostengünstiger. Es ist relativ einfach durchzuführen ist und daher in zahlreiche POC Einstellungen angewendet werden.
" Der Test ermöglicht eine hochspezifische C. trachomatis Erkennung mit Empfindlichkeitsstufen deutlich verbessert im Vergleich zu derzeit verfügbaren C. trachomatis POC -Tests ", sagt Ülo Langel , PhD, Professor für Molekulare Biotechnologie der Universität Tartu, Estland , und Professor für Neurochemie , Universität Stockholm , Die Schweden.
Bestehende Polymerase-Kettenreaktion (PCR ) basierenden Methoden zum Testen C. trachomatis werden weit angewendet, sondern sind nur für den Einsatz in Krankenhäusern mit geschultem Personal und teure Maschinen geeignet . Studien haben gezeigt, dass bis zu 50% der Patienten nie wieder zurückkehren , um das Diagnoseergebnis oder erforderliche Behandlung zu erhalten.
Obwohl mehrere SchnelldiagnosePOC -Tests wurden bereits entwickelt , keiner bieten eine vergleichbare Empfindlichkeit zu Krankenhaus-basierte Techniken . Neue unabhängige Studien haben gezeigt, dass derzeit POC-Teste haben eine Sensitivität von nur 10 % bis 40% . Eine erste Analyse der Leistung des neuen Assays zeigte eine Spezifität von 100% und eine Sensitivität von 83%, Hinweise auf sein Potenzial Zuverlässigkeit.
" Die erschreckend schwache Leistung der zur Verfügung stehenden POC -Tests für C. trachomatis hat ihre breitere Anwendung beschränkt , und es gibt einen klaren Bedarf an empfindlicher und kostengünstige diagnostische Plattformen. Daher besteht die Notwendigkeit für eine Anwendung vor Ort testen, dass vernünftigerweise bietet sensitiven Nachweis ", schließt Prof. Langel .
Rekombinase -Polymerase -Amplifikation ( RPA) ist eine Nukleinsäure -Amplifikationsverfahren ( NAAT ) - eine Labortechnik , die die in vitro Synthese einer Vielzahl von Kopien von DNA oder RNA aus einer ursprünglichen Vorlage erfordern . Diese Techniken wurden Diagnosetechnik revolutioniert. Aktuelle Technologien, die die Detektion von Amplifikation in Echtzeit zu ermöglichen, sich schnell zu diagnostischen Industrie-Standards.
C. trachomatis -Zellen enthalten die Plasmide (kleine DNA -Moleküle , die getrennt von der chromosomalen DNA sind ), die eine Anzahl von kodierenden Sequenzen . Zur Identifizierung und Verstärkung von RPA, ausgewählte Forscher ein Gen -Fragment innerhalb eines Gens ( CDS2 ) , die sich über sexuell übertragbare C. trachomatis -Stämmen konserviert wurde . Der Test erfordert nicht die Reinigung von Gesamt-DNA aus der Urinprobe . Erhitzen der Probe für fünf Minuten bei 90
Der C. trachomatis -Assay hier entwickelten konnte mindestens 50 Kopien des CDS2 Ziel zu erfassen . C. trachomatis Häfen im Durchschnitt zwischen vier und zehn Kopien des Plasmids pro Elementarkörperin Abhängigkeit von der Belastung und Entwicklungsstadium. Die kleinste nachweisbare Menge des C. trachomatis RPA Assay kann daher von 5 bis 12 Erreger pro Reaktion umgesetzt werden und ist in dem gleichen Bereich wie andere Nukleinsäureamplifikation basierenden Techniken .
Der Test wurde auf Urinproben von 70 Patienten (51 Frauen und 19 Männer) die Teilnahme an einem sexuellen Gesundheit Klinik in Estland getestet. Die Proben wurden parallel mit RPA und Roche Cobas Amplicor C. trachomatis -Assays getestet.
Fifty- acht getesteten Proben in beiden Tests negativ. Da keine falschen Negativen erkannt wurden, kann die klinische Spezifität der C. trachomatis RPA -Assay auf 100% geschätzt werden.
Zwölf der getesteten Proben positiv mit dem Roche -Test. Davon sind 10 positiv getestet und zwei negativ getestet in der RPA -Reaktion . Basierend auf diesen Ergebnissen kann der klinische Empfindlichkeit des RPA -Test bei 83 % geschätzt werden.
Von den 12 Patienten, die positiv getestet , drei klagten über Symptome. Die anderen neun Patienten waren asymptomatisch . Der 58 C. trachomatis - negativen Patienten , 15 ( 26%) beschwert von Symptomen, die mit C. trachomatis -Infektion verbunden werden konnte. Einer von ihnen positiv getestet N. gonorrhoeae und M. genitalium . Andere wurden mit Blasenentzündung ( zwei Patienten) festgestellt , bakterielle Vaginose ( fünf Patienten ) , Hefe-Infektion ( vier Patienten ) , oder Bauchschmerzen nicht- gynäkologischen Ursprungs ( drei Patienten ) .