Die Pilzinfektion invasiver Aspergillose (IA) können lebensbedrohlich sein , vor allem bei Patienten , deren Immunsystem geschwächt durch Chemotherapie oder Immunsuppressiva . Trotz der kritischen Notwendigkeit einer Früherkennung, bleibt IA schwer zu diagnostizieren. Eine Studie im Journal of Molecular Diagnostics gegen drei Diagnosetests und festgestellt, dass die Kombination von Nukleinsäuresequenz -basierte Amplifikation (NASBA ) und quantitative Echtzeit- PCR ( qPCR) erkennt Aspergillose mit 100% Genauigkeit .
IA wird durch den Pilz Aspergillus fumigatus , die von vielen Pathologen als der weltweit am meisten schädlichen Form sein, hervorgerufen wird. "Herkömmliche Diagnoseverfahren , wie Kultur und Histopathologie von infizierten Geweben , oft nicht zu erkennen Aspergillus ", kommentiert Studienleiter Yun Xia , PhD, der Erste Affiliated Hospital der Chongqing Medical University, Chongqing, China.
In dieser retrospektiven Studie werteten die Wissenschaftler die diagnostische Leistung von zwei Nukleinsäureamplifikation Assays (qPCR und NASBA ) und eine Antigen-Nachweis -Verfahren ( Galactomannan Enzym -Immunoassay [ GM- ELISA ] ) unter Verwendung von Blutproben von 80 Patienten mit hohem Risiko für gesammelt IA . Von den 80 Patienten , 42,5% erwiesen hatte oder wahrscheinliche IA . Die Patienten kamen aus der Intensivmedizin , Hämatologie , Neurologie, Nephrologie , Geriatrie, und anderen Krankenhausabteilungen .
Die Tests wurden einzeln und in Kombination untersucht. Individuell hatte NASBA die höchste Empfindlichkeit ( 76,47 %), während qPCR bot die höchste Spezifität ( 89.13 %). NASBA war auch die Prüfung , die am besten angedeutet , dass ein Patient nicht die Infektion ( negativer prädiktiver Wert ) haben . NASBA und qPCR jede hatte eine hohe Youden Index , ein Maß für die Wirksamkeit eines diagnostischen Markers .
Die Kombination der Tests verbessert die Ergebnisse . Die Kombination von NASBA und qPCR führte zu 100% Spezifität und 100% positive Vorhersagewert ( die Wahrscheinlichkeit, dass Probanden wirklich haben die Infektion).
" Da jeder Test hat Vor- und Nachteile , kann eine Kombination von verschiedenen Tests in der Lage, bessere diagnostische Wert als durch einen einzigen Test zur Verfügung gestellt zu liefern ", sagt Dr. Xia . Die Kombination von NASBA und qPCR sollte nützlich ohne IA in Verdachtsfällen , wodurch sowohl die Leiden und Kosten für immungeschwächte Patienten. Andererseits könnte die Kombination aus NASBA und qPCR besser geeignet für das Screening von Patienten der Infektion vermutet wird , da dieser Assay die höchste Empfindlichkeit . "
Die Autoren merken an , dass NASBA bietet die Vorteile einer schnellen Verstärkung (90 Minuten) und die einfache Bedienung mit niedrigen Kosten im Vergleich zu Instrument qPCR und GM- ELISA . Sie warnen , dass, obwohl GM- ELISA ist weit verbreitet und routinemäßig für Aspergillose Diagnose verwendet , diese Studie zeigt, dass es hatte eine geringe Empfindlichkeit ( 52,94 %) mit angemessenen Spezifität ( 80,43 % ) und ist damit "minderwertig sowohl NASBA und qPCR . "
Die A. fumigatus Schimmel ist überall in der Umwelt und auf verwesenden Pflanzenmaterial gefunden. Für gesunde Menschen Exposition gegenüber dem Pilz kann belanglos sein, aber es kann erheblichen Morbidität und Mortalität für Menschen mit geschwächtem Immunsystem , einschließlich Patienten, die Organtransplantationen unterzogen haben oder haben fortschrittliche verursachen AIDS . Auch Patienten mit bescheideneren Immunstörungen , wie Diabetes, schlechte Ernährung , Steroid verwenden , oder Lungenerkrankungen, kann stark infiziert werden . Symptome können Fieber , Husten , Atemnot, Brustschmerzen , Krampfanfälle und fokale neurologische Probleme .
Die Kriterien für die ein hohes Risiko für IA enthalten hohe (1,3) -β -D-Glucan Stufen (> 60 pg / mL) , immungeschwächten Status und einer von sechs Bedingungen ( Empfänger einer allogene Stammzelltransplantation , hämatologische Erkrankungen, schwere Immundefekt , eine längere Verwendung von Kortikosteroiden , Fieber oder Brust infiltrieren nicht mehr auf Routine Antibiotika Oder radiologischen Anzeichen von Pilzerkrankungen ). Die Patienten hatten keine antimykotische Therapie nicht erhalten , bis nach Blutproben wurden gesammelt.
Der erste Test war die Messung von GM, einem Polysaccharid -Komponente der Pilzzellwand , die während der Infektion in Serum und BAL Flüssigkeit freigesetzt werden können . GM wurde unter Verwendung eines kommerziell erhältlichen ELISA-Kits ( ; Bio-Rad Laboratories , Hercules, CA Platelia Aspergillus ) gemessen. In dieser Studie wurde ein GM (GMI ) von 0,5 verwendet .
Der zweite Test war ein Aspergillus DNA-Extraktion und Echtzeit- qPCR -Assays. Die DNA wurde aus dem Plasma unter Verwendung eines QIAamp Blood Mini Kit (Qiagen , Hilden, Deutschland ) extrahiert. Die gereinigte DNA wurde dann durch einen Aspergillus genus - spezifischen qPCR Assay mit SYBR Green Chemistry und Primer zur Förderung der 28S -rRNA-Gens amplifiziert. Die untere Nachweisgrenze wurde empirisch als 10 Kolonie - bildenden Einheiten von Aspergillus Konidien pro Reaktion.
Der dritte Test war ein Aspergillus RNA-Extraktion und NASBA -Assay. Gesamt-RNA wurde aus dem Plasma mit Hilfe eines Blut / Flüssigkeitsprobe Gesamt-RNA schnelle Extraktion Kit ( BioTeke , Beijing, China ) extrahiert. Eine hochkonservierte Region 18S rRNA spezifisch für die Gattung Aspergillus wurde als Detektionsziel ausgewählt. Es wurde dann unter Verwendung eines Paares von Primern amplifiziert. Blindkontrolle , Negativkontrolle ( RNA von Patienten ohne Aspergillus -Infektion extrahiert ) und der positiven Kontrolle (RNA aus Aspergillus in Reinkultur extrahiert ) wurden in jedem Durchlauf .